目的 探讨巨噬细胞帽状蛋白(CAPG)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及其对ESCC细胞体外迁移、增殖、侵袭的影响以及相关机制的影响。
方法 通过对来自基因表达数据库(GEO)的ESCC单细胞转录组数据进行综合分析,以揭示肿瘤间的异质性。整合和标准化GSE188900数据集的ESCC样本数据,采用主成分分析(PCA)对标准化数据进行降维和聚类,采用Single R算法注释细胞,使用inferCNV R包识别肿瘤细胞。最终确定食管上皮细胞为肿瘤细胞来源,并对高变基因进行基因集变异分析(GSVA)。随后,采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)验证CAPG在ESCC组织样本和正常样本中的表达量。靶向CAPG的小片段干扰RNA(siRNA)转染人ESCC细胞EC1,以降低EC1细胞中CAPG的表达。通过体外功能实验验证CAPG对EC1细胞的增殖、迁移和侵袭等能力的影响。最后,通过qRT-PCR验证CAPG对ESCC细胞中上皮-间质转化(EMT)通路相关分子表达的影响。
结果 通过对ESCC单细胞测序数据分析,发现食管上皮细胞为肿瘤细胞来源,而且EMT通路相关基因在食管上皮细胞中显著富集。将上皮细胞相关基因与EMT通路相关基因取交集得到核心基因:CAPG。与正常组织相比,ESCC组织中CAPG表达明显上调。其次,体外功能实验表明,CAPG敲低显著影响人ESCC细胞EC1的增殖、迁移和侵袭,而且CAPG敲除影响多个EMT相关分子的表达。最后,CAPG作为EMT通路相关基因的成员,促进ESCC中肿瘤细胞的克隆性增殖和转移。
结论 CAPG在ESCC中高表达,具有促进ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的作用;并且CAPG敲除影响多个EMT通路相关分子的表达。
关键词: 食管鳞状细胞癌; 巨噬细胞帽状蛋白; 单细胞测序; 增殖; 迁移; 上皮-间质转化通路